bong da.tv

  • Sự đóng góp
  • Thời gian cập nhật 07/10/2021
  • 3 readings
  • Rating 0
  • great
  • Step on

Giới thiệu về bong da.tv

ty le keo bong da hom nay

Heme oxygenase 1 (HO-1) thuộc một loại protein sốc nhiệt, là enzyme giới hạn tốc độ phân hủy heme. Nó có thể phân hủy heme thành biliverdin, CO và NO, v.v. và có thể bị ảnh hưởng bởi nhiều loại các yếu tố gây stress oxy hóa. Và kích hoạt cytokine, nó có các chức năng quan trọng trong cơ thể như chống oxy hóa, phản ứng chống viêm và điều hòa miễn dịch [1], nó có tác dụng bảo vệ động vật và thực vật. Một số lượng lớn các nghiên cứu lâm sàng đã xác nhận rằng những người tiếp xúc với rượu quá mức trong thời gian dài có xác suất rối loạn chuyển hóa xương, loãng xương hoặc hoại tử chỏm xương đùi cao hơn đáng kể so với dân số bình thường [2-3]. Một nghiên cứu khác cho thấy rượu có thể làm tăng nguy cơ gãy xương và làm chậm quá trình chữa lành gãy xương [4]. Trong những năm gần đây, các nghiên cứu đã phát hiện ra rằng ảnh hưởng của rượu đối với sự trao đổi chất của xương và phản ứng stress oxy hóa do rượu gây ra[5-6] có liên quan chặt chẽ. Do đó, nghiên cứu này đã cố gắng chuyển gen HO-1 của người vào nguyên bào xương người được nuôi cấy trong ống nghiệm để quan sát khả năng chịu đựng của nguyên bào xương người đối với rượu và sự tiết BMP-2 và TGF-β1 sau khi gen HO-1 được chuyển gen. , để cung cấp cơ sở lý thuyết cho việc HO-1 có thể được sử dụng như một tác nhân sinh học để điều trị các bệnh chuyển hóa xương do rượu hay không.
1Vật liệu và phương pháp
1.1 Thuốc thử và dụng cụ chính
Lipofectamine 2000 (Invitrogen, USA), MTT (Sigma), Bộ phát hiện apoptosis Annexin V-FITC (Biyuntian), HO-1 plasmid biểu hiện sinh vật nhân chuẩn (Phòng thí nghiệm khoa học Biovector), MDA, bộ phát hiện ROS và bộ phát hiện SOD (Biyuntian), BMP- 2 và bộ phát hiện TGF-β1 ELISA (R&D Systems, Inc.), máy đo tế bào lưu lượng Accuri C6 (BD Biosciences), máy quang phổ 723 (Shanghai Spectrometer Co., Ltd.), Sunrise Microplate Reader (Tecan Company), Máy quang phổ huỳnh quang 930A (Thượng Hải Công ty TNHH Sanke Instrument).
1.2 Phương pháp thực nghiệm
1.2.1 Phân lập và nuôi cấy nguyên bào xương người tham khảo Yang Yusheng và cộng sự. [7] Phân lập và nuôi cấy các nguyên bào xương bình thường của con người. Các nguyên bào xương cô lập được phân tán hoàn toàn và lơ lửng trong môi trường DMEM (chứa 10% huyết thanh bò thai), đặt trong tủ ấm 37 ℃, 5% CO2, và nuôi cấy, và môi trường được thay đổi cách ngày.
1.2.2 Chuyển nạp nguyên bào xương người HO-1 và phân nhóm thử nghiệm Lấy tế bào ở pha tăng trưởng theo lôgarit, điều chỉnh nồng độ tế bào thành 1 × 104 / mL và cấy chúng vào đĩa 96 giếng. Khi tế bào trên 80%, thực hiện theo phương pháp chuyển nạp Plasmid Lipofectamine 2000 kit hướng dẫn vận hành, thiết lập nhóm chứng trắng (chưa được truyền nhiễm), nhóm chuyển nạp plasmid 100 nmol / L HO-1, mỗi nhóm có 6 mẫu song song. Sau 24 giờ truyền nhiễm, quan sát hiệu ứng chuyển nhiễm dưới kính hiển vi huỳnh quang.Trong thử nghiệm, một nhóm chứng âm tính (không có rượu và không có chuyển nhiễm HO-1), một nhóm đối chứng dương tính (với rượu 100 mmol / L và không có chuyển nhiễm với HO-1) và nhóm chuyển nhiễm HO-1 (với 100 mmol / L) được thiết lập trong thí nghiệm Rượu, chuyển hóa HO-1), tham chiếu đến nồng độ cồn trong thí nghiệm[5].
1.2.3 Phát hiện MTT hoạt động của tế bào Sau 24 giờ tiếp xúc với cồn trong mỗi nhóm, thêm 20 μL 5 mg / mL MTT vào mỗi giếng, tiếp tục ủ trong 4 giờ, loại bỏ phần nổi phía trên, thêm 150 μL DMSO, lắc ở nhiệt độ phòng trong 10 phút, và sử dụng ghi nhãn enzym Giá trị độ hấp thụ (giá trị OD) của mỗi giếng được đo bằng thiết bị ở bước sóng 490 nm. Khả năng sống của tế bào = (giá trị OD của nhóm thực nghiệm / giá trị OD của nhóm đối chứng âm tính) × 100%.
1.2.4 Xác định ROS trong tế bào Điều chỉnh nồng độ tế bào thành 2 × 105 / mL và cấy vào đĩa 6 giếng có nắp đậy vô trùng. Quá trình truyền và phân nhóm tế bào giống như trong 1.2.2. Sau 24 giờ tiếp xúc với cồn, tấm kính che được tráng hai lần bằng dung dịch đệm PBS và thao tác được thực hiện theo hướng dẫn của bộ phát hiện ROS. Cường độ huỳnh quang của mỗi nhóm tế bào được đo bằng máy quang phổ huỳnh quang.
1.2.5 Xác định hàm lượng MDA và SOD trong tế bào Điều chỉnh nồng độ tế bào thành 1 × 106 / mL, cấy vào đĩa 6 giếng, chuyển nạp tế bào và phân nhóm giống như 1.2.2. Sau 24 giờ tiếp xúc với rượu, đầu tiên thu thập phần nổi trên bề mặt nuôi cấy tế bào để phát hiện BMP-2 và TGF-β1, sau đó thu thập tế bào và nghiền siêu âm tế bào để chiết xuất protein tế bào. Phát hiện nội dung của MDA và SOD trong các ô theo hướng dẫn của bộ MDA và SOD.
1.2.6 Phát hiện BMP-2 và TGF-β1 trong bề mặt tế bào bằng ELISA Chất nổi trên tế bào được thu thập trong 1.2.5 được sử dụng để phát hiện BMP-2 và TGF-β1 do tế bào tiết ra bằng phương pháp miễn dịch liên kết enzym kẹp kháng thể kép. Chuẩn bị các chất chuẩn và mẫu theo đúng hướng dẫn của bộ dụng cụ, đo độ hấp thụ của từng mẫu bằng máy đọc vi tấm, và tính hàm lượng tương ứng của BMP-2 và TGF-β1 trong các ô.
1.3 Phương pháp thống kê
Dữ liệu đo được biểu thị dưới dạng trung bình ± độ lệch chuẩn (x ± s). Spss 13.0 được sử dụng để phân tích thống kê. ANOVA một chiều được sử dụng để so sánh giữa nhiều nhóm. Khi so sánh giữa hai nhóm, phương pháp SNK được sử dụng cho phương sai đồng nhất và phương pháp Games-Howell được sử dụng cho phương sai không đồng đều. Sự khác biệt có ý nghĩa thống kê khi P <0,05.
2 kết quả
2.1 Hình thái của nguyên bào xương sau khi chuyển nạp HO-1
24 giờ sau khi chuyển nạp HO-1 plasmid, hình thái của nguyên bào xương được quan sát dưới kính hiển vi huỳnh quang. tế bào chất của nguyên bào xương. xem hình 1.
2.2 Kết quả kiểm tra khả năng tồn tại của tế bào
Với cồn 100 mmol / L trong 24 giờ, khả năng sống sót trong tế bào tương đối của nhóm chứng dương tính và nhóm chuyển giao HO-1 là (40,33 ± 9,18)% và (67,35 ± 6,90)%. So với nhóm chứng âm tính, khả năng sống sót tế bào của nhóm chứng dương tính và nhóm chuyển gen HO-1 giảm đáng kể sau khi uống rượu (P <0,05). Tuy nhiên, khả năng sống sót của tế bào tương đối của nhóm chuyển giao HO-1 cao hơn đáng kể so với nhóm đối chứng dương tính và sự khác biệt có ý nghĩa thống kê (P <0,05), như trong Hình 2.
2.3 Kết quả phát hiện ROS, SOD và MDA trong ô
Hàm lượng ROS, SOD và MDA trong nguyên bào xương được xử lý bằng cồn trong 24 giờ được thể hiện trong Bảng 1. Sau khi sử dụng cồn 100 mmol / L cho nguyên bào xương, hàm lượng của ROS và MDA cao hơn đáng kể so với ở đối chứng âm tính. nhóm (P <0,05)), trong khi đơn vị hoạt động SOD thấp hơn đáng kể so với nhóm chứng âm tính (P <0,05).Khi rượu tác động lên nguyên bào tạo xương HO-1 được truyền nhiễm, mặc dù những thay đổi của ROS, SOD và MDA tương tự như những thay đổi của nhóm kiểm soát tích cực (so với nhóm kiểm soát âm tính), nhưng so với nhóm kiểm soát tích cực, ROS và MDA tăng đáng kể. Giảm, hoạt tính SOD tăng lên đáng kể (P <0,05).
2.4 Kết quả phát hiện hàm lượng BMP-2 và TGF-1 trong ô
So với nhóm chứng âm tính, nhóm chứng dương tính và nhóm chuyển đổi HO-1 được điều trị bằng rượu trong 24 giờ, nồng độ BMP-2 và TGF-β1 trong tế bào tăng lên, và sự khác biệt có ý nghĩa thống kê (P <0,05). So với nhóm chứng dương tính, nồng độ BMP-2 và TGF-β1 trong tế bào của nhóm chuyển gen HO-1 đã giảm đáng kể sau khi uống rượu (P <0,05), như trong Bảng 2.
3 Thảo luận
Mặc dù uống vừa phải rất tốt cho quá trình trao đổi chất của xương [8], nhưng uống quá nhiều trong thời gian dài có thể gây mất xương trong cơ thể và các nghiên cứu đã xác nhận rằng uống rượu trở thành một yếu tố nguy cơ quan trọng gây loãng xương và hoại tử chỏm xương đùi [2]. Các cơ chế của rượu đối với chuyển hóa xương chủ yếu bao gồm: (1) Rượu có thể ức chế hoạt động và sự tăng sinh của nguyên bào xương, đồng thời ức chế sự hình thành các tế bào tiền thân của chúng.[9]; (2) Rượu có thể gây ra sự biệt hóa của tế bào mô đệm tủy xương thành tế bào mỡ và làm giảm sự biệt hóa của nguyên bào xương [10], đó là lý thuyết hóa học về sự hình thành mỡ của tế bào mô đệm tủy xương do rượu gây ra; (3) Rượu có thể cản trở hoạt động của các hormone khác trong cơ thể, chẳng hạn như PTH và glucocorticoid.
HO là một hệ thống enzyme microomal có mặt rộng rãi trong động vật và thực vật, và tham gia vào nhiều quá trình sinh lý và bệnh lý khác nhau, bao gồm ba isoenzyme HO-1, HO-2 và HO-3. HO-1 là chất cảm ứng và có thể được kích hoạt bởi các yếu tố ứng suất oxy hóa và phản ứng viêm. Nó có khả năng chống oxy hóa rất mạnh, phản ứng chống viêm và khả năng điều hòa miễn dịch. [1]. Các nghiên cứu đã phát hiện ra rằng HO-1 không chỉ có thể tạo ra các tế bào mô đệm tủy xương để biệt hóa thành nguyên bào xương [11], và HO-1 có thể ức chế sự biệt hóa của tế bào tiền thân của tế bào hủy xương thành tế bào hủy xương bằng cách ức chế thụ thể yếu tố kích thích thuộc địa đại thực bào c-fms, do đó làm giảm quá trình tiêu xương [12]. Trong thí nghiệm này, tác giả sử dụng công nghệ chuyển gen để truyền HO-1 vào nguyên bào xương người, để HO-1 được biểu hiện cụ thể và cao trong tế bào, để quan sát khả năng chịu đựng của nó đối với tác hại của rượu và nghiên cứu sự chuyển nạp cụ thể HO-1. có thể ức chế tổn thương nguyên bào xương do rượu gây ra. Kết quả của MTT trong nghiên cứu này cho thấy rằng so với các tế bào trong nhóm đối chứng âm tính, mặc dù khả năng sống của tế bào của nhóm chuyển nạp HO-1 cũng giảm đáng kể, nhưng khả năng sống của tế bào của nó cao hơn đáng kể so với khả năng sống của tế bào của nhóm đối chứng dương tính. . Có thể thấy rằng khi các nguyên bào xương của con người được truyền HO-1, khả năng chống lại tác hại của rượu của các tế bào được nâng cao rõ rệt. Dựa trên điều này, tác giả suy đoán rằng sự biểu hiện cụ thể và cao của HO-1 có thể ức chế hiệu quả tác hại của rượu đối với nguyên bào xương và đóng vai trò bảo vệ nguyên bào xương.
Nguyên bào xương có thể tiết ra protein hình thái xương (BMP) và yếu tố tăng trưởng biến đổi-β (TGF-β), đóng một vai trò quan trọng trong việc hình thành và sửa chữa xương [13]. Trong số đó, TGF-β1 có mối quan hệ gần gũi nhất với chuyển hóa xương, điều hòa sự tăng sinh của tế bào gốc trung mô tủy xương và khiến chúng biệt hóa thành nguyên bào xương. BMP-2 có khả năng mạnh mẽ để tạo ra sự biệt hóa nguyên bào xương và cũng có thể tạo ra sự biệt hóa tạo xương của các tế bào gốc trung mô tủy xương. Nó được công nhận là một yếu tố tạo xương hiệu quả cao [14]. Các nghiên cứu đã phát hiện ra rằng sau 4 tuần gãy xương, sự biểu hiện của BMP-2 và TGF-β trong mô sẹo đã giảm đáng kể, do đó làm chậm quá trình sửa chữa và chữa lành vết gãy. Có thể thấy rằng sau khi gãy xương, biểu hiện của BMP-2 và TGF-β quá thấp Là một trong những nguyên nhân có thể gây ra tình trạng gãy xương do loãng xương chậm lành [15]. Kết quả của thí nghiệm này cho thấy sự biểu hiện của BMP-2 và TGF-β1 trong tế bào hủy xương bao gồm HO-1 được chuyển gen cao hơn đáng kể so với nhóm đối chứng dương tính. Kết quả này cho thấy sự chuyển nạp HO-1 không chỉ có thể tăng cường hoạt động của nguyên bào xương sau tác dụng của rượu, mà còn làm tăng BMP-2 và TGF-β1 trong nguyên bào xương. Tác giả suy đoán rằng việc chuyển đổi HO-1 có thể đẩy nhanh quá trình chữa lành bệnh loãng xương và gãy xương do rượu gây ra, nhưng cần phải có thêm các thí nghiệm để chứng minh điều đó.
Stress oxy hóa là sự mất cân bằng giữa quá trình oxy hóa và tác dụng chống oxy hóa trong cơ thể, có thể gây ra quá trình peroxy hóa lipid và tổn thương oxy hóa DNA cho cơ thể. ROS là một chất oxy hóa quan trọng gây ra stress oxy hóa trong cơ thể, MDA là sản phẩm cuối cùng của quá trình peroxy hóa lipid, và SOD là một enzym chống oxy hóa quan trọng trong cơ thể. Sự thay đổi của các chất này có thể phản ánh trực tiếp sự cân bằng oxy hóa của cơ thể. Các nghiên cứu hiện tại đã chỉ ra rằng một lượng lớn rượu có thể làm tăng mức độ oxy hóa của cơ thể, đồng thời khả năng chống oxy hóa của nó giảm đi. Khi ức chế sự hình thành các chất oxy hóa trong cơ thể, nó có thể cải thiện tình trạng tổn thương xương do rượu [3]. HO có tác dụng chống oxy hóa mạnh nên khi cơ thể xảy ra stress oxy hóa Bài viết này được cung cấp bởi wWw.DyLw.NeT, tờ báo chuyên nghiệp đầu tiên viết báo cáo giáo dục và dịch vụ viết và xuất bản, chào mừng bạn đến với dYlw.nET, Hệ thống HO được kích hoạt để đóng vai trò chống oxy hóa, giảm các tổn thương cho cơ thể do stress oxy hóa gây ra. Kết quả của nghiên cứu này cho thấy khi rượu tác động lên nguyên bào xương, hàm lượng ROS và MDA trong tế bào xương của đối chứng dương tính cao hơn đáng kể so với đối chứng âm. nguyên bào xương. Phù hợp với nghiên cứu trước đây [5]. Tuy nhiên, trong thí nghiệm này, hàm lượng ROS và MDA trong tế bào xương được chuyển giao bởi HO-1 thấp hơn đáng kể so với nhóm đối chứng tích cực, trong khi hàm lượng SOD cao hơn đáng kể so với nhóm đối chứng tích cực. được thấy rằng sự chuyển nạp HO-1 có thể ức chế đáng kể cảm ứng rượu. Phản ứng stress oxy hóa của nguyên bào xương có tác dụng bảo vệ nguyên bào xương.
Tóm lại, kết quả của thí nghiệm này cho thấy sự chuyển nạp HO-1 có thể tăng cường hoạt động của nguyên bào xương sau tác động của rượu, và có tác dụng bảo vệ nguyên bào xương. Cơ chế bảo vệ có thể liên quan đến sự ức chế của HO-1 đối với stress oxy hóa do rượu trong nguyên bào xương. Ngoài ra, sau khi chuyển nạp HO-1, sự bài tiết của nguyên bào xương BMP-2 và TGF-β1 được tăng lên đáng kể, giúp tăng cường sự biệt hóa tạo xương của các tế bào trung mô, do đó cải thiện khả năng của cơ thể để sửa chữa các tổn thương xương do rượu gây ra.
người giới thiệu
  [1]Araujo JA, Zhang M, Yin F. Heme oxygenase-1, quá trình oxy hóa, viêm và xơ vữa động mạch[J]Front Pharmacol, 2012, 3: 119.
  [2]Chakkalakal DA. Mất xương do rượu và thiếu sửa chữa xương[J]Rượu Clin Exp Res, 2005, 29 (12): 2077-2090.

Chúc các bạn đọc tin bong da.tv vui vẻ!

Original text